Estratégias bioanalíticas para caracterização de biomarcadores de exposição ao mercúrio em Arapaima gigas e Serrasalmus rhombeus do rio Madeira/bacia amazônica

Abstract

Este trabalho apresenta os resultados de proteínas associadas ao mercúrio em amostras de tecido muscular e hepático de pirarucu (Arapaima gigas) e piranha preta (Serrasalmus rhombeus) oriundos do complexo hidrelétrico de Jirau, na Bacia do Rio Madeira, região amazônica do Brasil. O proteôma do músculo e fígado dessas espécies foi obtido por eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida (2D PAGE). O mercúrio presente nos spots proteicos foi determinado por espectrometria de absorção atômica em forno de grafite (GFAAS) após mineralização ácida assistida por banho de ultrassom. Os spots proteicos que apresentaram mercúrio foram caracterizados por espectrometria de massas por ionização com eletrospray em sequência (ESI- MS/MS) após digestão tríptica. As determinações GFAAS indicaram que a maior parte do mercúrio está ligada a fração proteica com massa molar (Mm) inferior a 90 kDa. As concentrações de mercúrio nos spots apresentaram-se na faixa de 4,07 – 164,63 µg g-1 no tecido muscular de pirarucu; 0,86 – 25,34 µg g-1 no tecido hepático de pirarucu; 7,67 – 156,18 µg g-1 no tecido muscular de piranha preta e 2,17 – 31,42 µg g-1 no tecido hepático de piranha preta. A análise por ESI-MS/MS permitiu caracterizar em dezenove spots proteicos as seguintes proteínas e/ou enzimas: Triosephosphate isomerase, Fructose-bisphosphate aldolase, Ckmb protein,, Cofilin 2 (Muscle), Actin_ alpha_ cardiac muscle 1a, Actin_ alpha 1_ skeletal muscle, Novel protein similar to zebrafish hemoglobin alpha-adult 1 (Hbaa1), Hemoglobin subunit alpha, Embryonic 1 beta-globin, Embryonic globin beta e2, Hydroxyacyl-Coenzyme A dehydrogenase, Adenosylhomocysteinase, Glycine N-methyltransferase, Peroxiredoxin 2, Enolase 1_ (Alpha), Fatty acid binding protein 11a, Parvalbumin 3, 3-hydroxyanthranilate 3_4-dioxygenase e Glutathione peroxidase.