Efeito combinado de KR-12-a5 e EGCG sobre a viabilidade e potencial de mineralização em células pulpares para aplicabilidade endodôntica
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Data
2022-08-19
Autores
Orientador
Duque, Cristiane 
Coorientador
Pós-graduação
Curso de graduação
Odontologia - FOA
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Trabalho de conclusão de curso
Direito de acesso
Acesso restrito
Resumo
Resumo (português)
Um dos grandes desafios da Endodontia e da Odontopediatria é o tratamento de dentes permanentes imaturos que sofreram danos pulpares irreversíveis, pois além de tratar a infecção, deve permitir o fechamento natural do ápice e, muitas vezes estimular a reparo da lesão periapical. Em busca de compostos com ampla atividade terapêutica, peptídeos catiônicos antimicrobianos e derivados de plantas como os flavonoides, têm recebido destaque na literatura médica, mas ainda poucos estudos têm avaliado seus efeitos para aplicação em Odontologia. O objetivo do estudo foi avaliar in vitro a viabilidade celular e capacidade indutora de mineralização dentinária da combinação do peptídeo antimicrobiano KR-12-a5 e do flavonoide EGCG. Células pulpares indiferenciadas humanas (hDPC) foram expostas a concentrações pré-determinadas de EGCG e KR-12-a5, de forma isolada ou combinada, em comparação ao controle Hidróxido de cálcio (HC), sendo estes diluídos em meio osteogênico de forma contínua por 24h, 48h e 72h e determinada a viabilidade celular por meio do ensaio colorimétrico de resazurina. Imagens das células tratadas com os compostos por 48h foram obtidas em microscopia de fluorescência com a coloração DAPI(4,6-diamidino-2-fenilindol, Sigma-Aldrich) e realizada a contagem das células coradas/área. Foram realizados ensaios de vermelho de alizarina evidenciando os depósitos de nódulos mineralizados e estes foram conduzidos em paralelo com a viabilidade celular nos períodos de 13 e 21 dias. Também foram realizados os ensaios de produção de proteína total e de fosfatase alcalina, assim, após o tratamento das células com as concentrações pré-estabelecidas dos compostos isolados e em combinação diluídos em meio osteogênico por 48 horas e realizadas trocas de meio osteogênico até completar 13 dias. Os valores dos dados apresentaram distribuição normal (homogeneidade) e as variáveis foram submetidas à ANOVA e em seguida pelo Teste de Tukey (p<0.05). Todas as análises foram realizadas com limite de significância de 5 %. Os resultados obtidos mostraram que em baixas concentrações, EGCG e KR-12-a5 isolados ou combinados não foram tóxicos para as células pulpares. EGCG isolado e combinado com KR-12-a5 foram capazes de induzir a mineralização no tempo de 21 dias e estimular a atividade da fosfatase e produção de proteína total no tempo de 13 dias. Conclui-se que a associação de KR-12-a5 e EGCG é benéfica, uma vez que em baixas concentrações não causaram citotoxicidade e induziram a expressão de marcadores de mineralização nas células pulpares, podendo ser considerados, dessa forma, uma alternativa natural promissora de princípio ativo para medicação intracanal.
Resumo (inglês)
One of the challenges of Endodontics and Pediatric Dentistry is the treatment of immature permanent teeth, many irreversible pulp damages, as they will allow the natural closure of the apex of the lesion, sometimes simulating a periapical. In studies of broad therapeutic activity, antimicrobial cationic peptides and plant products such as flavonoids have been highlighted in the literature, but their effects for application in dentistry have yet to be evaluated. The objective of the study was invitro the cell viability and the dentinal mineralization inducing capacity of the antimicrobial peptide KR-12-a5 and the flavonoid EGCG. Human undifferentiated pulp cells (HC) oxides released in predetermined osteogenic medium of EGCG and KR-12-a5, alone or in combination, compared to the control Calcium hydroxide (HC), being diluted in osteogenic medium continuously by 24h, 48h and 72h and determined cell viability through the resazurin colorimetric assay. Images of the cells treated with the compounds for 48h were obtained in fluorescence microscopy with DAPI (4,6-diamidino-2-phenylindole, Sigma-Aldrich) staining and stained cells/area were counted. Cellular assays of red numbers at 1 days of probability and 21 days assays of cellular occurrences occurred in probability numbers were performed. Assays were also carried out for the production of total and alkaline phosphatase, protein, after the treatment of the cells with the pre-established compounds isolated and diluted in osteogenic medium for 48 hours and changes of osteogenic medium were carried out until completing 13 days. The data values showed normal distribution (homogeneity) and variables were submitted to ANOVA and then to the Tukey test (p<0.05). All analyzes were performed with a significance limit of 5%. The results obtained showed that at low concentrations, EGCG and KR-12-a5 alone or in combination were not toxic to the pulp cells. EGCG alone and combined with KR-12-a5 was able to induce mineralization at 21 days and stimulate phosphatase activity and total protein production at 13 days. It is concluded that the association of KR-12-a5 and EGCG is benefical since in low concentrations they did not cause cytotoxicity and induced the expression of mineralization markers in pulp cells, and thus can be considered a promising natural alternative of active ingredient for intracanal medication.
Descrição
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Idioma
Português