Desenvolvimento de sistema de detecção e quantificação de Salmonella spp. por meio de número mais provável (NMP) associado a técnica de amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP) em carcaças de frango.

Carregando...
Imagem de Miniatura

Data

2022-07-01

Autores

Laurindo, Amanda Louise

Título da Revista

ISSN da Revista

Título de Volume

Editor

Universidade Estadual Paulista (Unesp)

Resumo

O Brasil ocupa hoje posição de destaque no cenário avícola como o segundo maior produtor e o maior exportador de carne de frango do mundo. No mercado interno, a carne de frango é preferência entre os brasileiros, seja por seu valor nutricional ou por seu preço mais acessível. Entretanto os números de casos de doenças de transmissão hídrica e alimentar – DTHA ainda são elevados. No Brasil, Salmonella spp. é um dos principais agentes envolvidos e a carne de frango e os ovos são os principais veículos. Atualmente os métodos de diagnóstico comumente utilizados para detecção e quantificação da Salmonella ssp. são onerosos, demorados ou de alta complexidade de execução. Desta maneira, este trabalho teve por objetivo o desenvolvimento de um sistema rápido, prático e de baixo custo para detecção e quantificação de Salmonella spp em carne de frango, unindo as técnicas de Número Mais Provável e Amplificação Isotérmica Mediada por Alças (NMP-LAMP). Os objetivos específicos deste trabalho foram comparar dois métodos de extração de DNA (fervura e beads magnéticas), testar dois protocolos para reações de LAMP (“in house” e kit colorimétrico) e por fim, comparar o NMP convencional e NMP associado à técnica de LAMP, no qual alíquotas foram retiradas nas etapas de pré enriquecimento e enriquecimento seletivo, a fim de realizar extração e, em seguida, a técnica de LAMP. Os resultados das extrações de DNA obtiveram valores de Cq semelhantes. Já os protocolos de LAMP apresentaram resultados idênticos. Por fim o NMP-LAMP apresentou bons resultados quando comparado ao NMP convencional, já que não houve diferença estatista entre as técnicas, demostrando que a união é promissora e sugerindo que é possível diminuir o tempo para obtenção de resultados. Entretanto os relatos acerca da união das técnicas ainda são escassos na literatura. Quanto aos custos, o maior valor da técnica de LAMP pode ser compensado pelo menor tempo na obtenção de resultados.
Brazil currently stands out in the poultry sector as the second largest producer and largest exporter of chicken meat in the world. In the domestic market, chicken meat is a nutritional preference among Brazilians, either for its value or for its more affordable price. Several cases of foodborne diseases are still higher. In Brazil, Salmonella spp. is one of the main agents involved and eggs and poultry meat are the main vehicle. Currently, the diagnostic methods commonly used for detection and quantification of Salmonella ssp. are costly, time-consuming, or highly complex to implement. Thus, this work aimed to develop a fast, practical, and low-cost system for the detection and quantification of Salmonella spp in poultry meat, combining the Most Probable Number and Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP-MPN) techniques. The specifics objectives of this work were compared with two methods of DNA extraction (boil and magnetic beads), test two protocols for LAMP reactions (in house and colorimetric kit), and finally the comparison between conventional MPN and LAMP-MPN, in which aliquots were removed in the pre-enrichment and selective enrichment stages to perform DNA extraction, and then the LAMP technique. Both protocols of DNA extraction obtained similar Cq values. The LAMP protocols presented the same result. The LAMP-MPN showed good results when compared to conventional NMP, since there was no statistic difference between the techniques, demonstrating that the union is promissory and suggesting that it is possible to reduce the time to obtain results. However, reports of the union of techniques are still scarce in the literature. As for cost, the higher technical value of LAMP-MPN can be offset by the shorter time to maintain results.

Descrição

Palavras-chave

Amplificação isotérmica, NMP-LAMP, Controle microbiológico, Isothermal amplification, Microbiological control

Como citar